百迪CHO添加物100ml
- 品名： 百迪CHO添加物100ml
- 型號(hào)： S1121-100
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 細(xì)胞傳代： 1. 37℃水浴預(yù)熱 CHO 無(wú)血清完全培養(yǎng)基； 2. 從培養(yǎng)箱中取出搖瓶，取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞密度及活力檢測(cè)； 3. 按照密度為3-5×105/ml個(gè)細(xì)胞接種至新的搖瓶中，置于37℃、CO2含量為5%-8%的培養(yǎng)箱中，搖床( 振幅50mm,轉(zhuǎn)速110-120rpm）上培養(yǎng)。 4. 當(dāng)活細(xì)胞密度≥4×106時(shí)進(jìn)行傳代，使用新鮮CHO無(wú)血清培養(yǎng)基按3-5×105/ml重懸細(xì)胞，并將細(xì)胞接種至新?lián)u瓶。 培養(yǎng)基適應(yīng)（大部分情況不需要）： 直接適應(yīng) 1. 將細(xì)胞直接稀釋到預(yù)熱的CHO培養(yǎng)基中，活細(xì)胞密度為3-5×105/ml，轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)容器中。 2. 置于培養(yǎng)箱，監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。如果使用直接適應(yīng)法觀察到細(xì)胞生長(zhǎng)不理想，則使用順序適應(yīng)法。 順序適應(yīng) 1. 細(xì)胞以3-5×105/ml 的密度接種至含1/3 CHO無(wú)血清培養(yǎng)基和2/3原培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%-8% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 2. 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到4×106/ml，以3-5×105/ml 的密度進(jìn)行傳代，接種至含2/3 CHO無(wú)血清培養(yǎng)基和1/3原培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 3. 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到4×106/ml，以3-5×105/ml個(gè)活細(xì)胞密度進(jìn)行傳代，接種至含100%CHO無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 4. 使用100% CHO無(wú)血清完全培養(yǎng)基繼續(xù)傳代幾次后，活細(xì)胞數(shù)應(yīng)超過(guò)4×106/mL，培養(yǎng)4-6天存活率≥90%，此時(shí)被認(rèn)為培養(yǎng)基適應(yīng)已經(jīng)完成。 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染： 1. 在瞬轉(zhuǎn)開(kāi)始之前，細(xì)胞應(yīng)完全適應(yīng)CHO無(wú)血清培養(yǎng)基，CHO細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)正常，傳代倍增時(shí)間穩(wěn)定（一般20-24h），細(xì)胞活率維持95%以上，方可進(jìn)行瞬轉(zhuǎn)測(cè)試。 2. 配置DNA-PEI 核酸-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物(DNA：1.5mg/L，PEI：7.5mg/L），室溫孵育15-20min。 3. 轉(zhuǎn)染時(shí)調(diào)整活細(xì)胞密度為6 x106 cells/ml（離心去掉舊培養(yǎng)液，改用新培養(yǎng)基最佳），并在Day1加入1.5mM 丙戊酸鈉。轉(zhuǎn)染之后的整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)該密切注意細(xì)胞活率和密度，在Day1-3-5-7-9-11添加5%補(bǔ)料進(jìn)行高密度高產(chǎn)量表達(dá)，葡萄糖按需添加。 4. 當(dāng)細(xì)胞活率低于80%，培養(yǎng)結(jié)束，收取上清液，純化目標(biāo)產(chǎn)物。 5. （培養(yǎng)過(guò)程中參數(shù)建議如下：初始培養(yǎng)溫度36.5℃，Day1溫度降低至32~33℃，pH:7.1±0.2，DO：40%。搖床轉(zhuǎn)速120rpm，振幅50mm, 5-8%CO2 ）。 |
| 注意事項(xiàng) | 1. 液體細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)置于2～8℃避光保存。 2. 針對(duì)不同的細(xì)胞株，由于代謝或?qū)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，需要針對(duì)性的優(yōu)化補(bǔ)料量，以更好的提高表達(dá)量。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | 2-8℃避光儲(chǔ)存，有效期12個(gè)月。 |
產(chǎn)品詳情
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO）是目前生物工程上廣泛使用的細(xì)胞，是表達(dá)復(fù)雜生物大分子的理 想宿主，在醫(yī)藥研發(fā)治療性蛋白生產(chǎn)中發(fā)揮著非常重要的作用。BDBIO CHO 無(wú)血清培養(yǎng)基 是一款無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物源成分的培養(yǎng)基，包括各種高性能、現(xiàn)成的 CHO 細(xì)胞系培養(yǎng)基和添 加物，是應(yīng)用 CHO-DG44、CHO-K1、CHO-S 和 CHO-GS 等細(xì)胞系進(jìn)行蛋白質(zhì)生產(chǎn)的理 想材料。
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