- 品名： 白鯊Biosharp BL1010A SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1X)
- 型號(hào)： BL1010A
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品詳情：
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 1×)，是一種經(jīng)過(guò)改良的以溴酚藍(lán)為染料的蛋白上樣緩沖液?？梢灾苯佑糜诩?xì)胞或組織樣品的裂解，并用于后續(xù)常規(guī)的SDS-PAGE蛋白樣品的上樣。使用該產(chǎn)品直接裂解蛋白樣品的優(yōu)點(diǎn)是比較便捷；缺點(diǎn)是裂解好的蛋白樣品不能用常規(guī)的蛋白定量方法測(cè)定蛋白濃度。這樣蛋白上樣量的均一性就較難控制，需要借助考馬斯亮藍(lán)等的染色結(jié)果或Western的檢測(cè)結(jié)果，來(lái)調(diào)整上樣量。當(dāng)細(xì)胞量或組織用量能控制得比較均一時(shí)，使用本裂解液直接裂解獲取蛋白樣品會(huì)比較便捷。
本緩沖液已經(jīng)含有還原劑DTT，有輕微刺激性氣味。
使用方法：
1、在常溫或不超過(guò)37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)。水浴溶解后立即常溫存放，盡量避免長(zhǎng)時(shí)間置于水浴中。
2、對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗一遍。按照6孔板每孔（細(xì)胞數(shù)量~2.5×106）加入150-250ulSDS-PAGE上樣緩沖液(1×)的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)和細(xì)胞充分接觸。通常SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)接觸細(xì)胞1-2秒后就會(huì)被裂解。裂解后的樣品收集到1.5 ml離心管內(nèi)。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞：450g，4℃離心5分鐘收集細(xì)胞，棄上清，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板（細(xì)胞數(shù)量~2.5×106）每孔細(xì)胞加入150-250ulSDS-PAGE上樣緩沖液(1×)，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。
4、組織樣品：
① 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
② 按照每20mg組織加入150-250ul SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)的比例加入緩沖液。
注：如裂解不充分可適當(dāng)添加上樣緩沖液，如需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少上樣緩沖液的用量。
③ 用玻璃勻漿器勻漿或者用27#針頭抽打5-10次，直至充分裂解。
④ 充分裂解后，將樣品收集到1.5 ml離心管內(nèi)。
注：如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈渦旋震蕩使樣品裂解充分。
5、95-100℃加熱10分鐘，以充分變性蛋白。
6、樣品冷卻到常溫后，12000 rpm離心2分鐘，上清即可直接上樣到SDS-PAGE凝膠加樣孔內(nèi)。通常電泳至藍(lán)色染料到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳。
注意事項(xiàng)：
1、裂解時(shí)如裂解不充分可以適當(dāng)添加上樣緩沖液，如需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少上樣緩沖液的用量。
2、樣品加熱前通常會(huì)發(fā)現(xiàn)蛋白樣品內(nèi)有粘稠的半透明狀物體，通常在上樣緩沖液內(nèi)加熱8-10分鐘后消失。如果起始時(shí)細(xì)胞或組織的用量較大，基因組DNA含量較高，加熱10分鐘后有可能仍然比較粘稠或者有粘稠狀的半透明物體。此時(shí)需要再煮沸10分鐘或者補(bǔ)加適量1×的蛋白上樣緩沖液后再煮沸5分鐘。充分煮沸后一方面可以使結(jié)合在基因組DNA上的蛋白充分釋放，同時(shí)會(huì)導(dǎo)致基因組DNA的部分?jǐn)嗔褟亩拐吵砀邢?，這樣就不會(huì)影響后續(xù)的上樣操作。
3、SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1X)必須完全溶解后再使用。建議根據(jù)使用量和頻率分裝凍存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期：
-20℃保存一年。
